### 哺乳动物蛋白提取试剂盒说明

本试剂盒包含以下组件：5X Buffer 10ml、5X NaCl 10ml、5X SDS 10ml、5X DOC 10ml、5X NP-40 10ml、20X PBS 10ml、Protease Inhibitor Cocktail 0.5ml。此试剂盒可在常温保存，唯有Protease Inhibitor Cocktail应储存于-20°C，保质期为24个月。

### 提取步骤

**1. 准备细胞裂解缓冲液：**根据5X Buffer、5X NaCl、5X SDS、5X DOC和5X NP-40按1:1:1:1:1比例（v/v）配置细胞裂解缓冲液。每1ml细胞裂解缓冲液适用于提取106~107个细胞或5~20mg组织。使用前加入10μlProtease Inhibitor Cocktail以保护蛋白。

**2. 细胞或组织洗涤：**

a. 对于贴壁细胞：首先去除培养基，用PBS缓冲液冲洗细胞两次，接着加入细胞裂解缓冲液（106~107个 cells/ml），将细胞充分浸入冰袋中，摇床孵育30分钟，并进行阶段性重悬，最终刮掉并收集裂解液。

b. 对于悬浮细胞：以700xg离心5分钟，弃去上清液。用PBS重悬细胞并洗涤两次，在4°C下离心，去除上清。将沉淀重悬于细胞裂解缓冲液中（106~107个 cells/ml），浸入冰袋，并在摇床上孵育30分钟。

c. 对于组织：将组织切成小块，用PBS冲洗两次。加入细胞裂解缓冲液（5~20mg组织/ml），然后将样品（含细胞裂解缓冲液）转移至预冷的微量匀浆器中，在冰上均匀化组织30~50次。注意：均质过程中要确保靶蛋白的功能完整性。之后以12,000xg在4°C下离心10分钟以沉淀细胞碎片，或进行高速离心（100,000xg，45分钟）制备蛋白质溶液。

**3. 保存提取的蛋白质：**将含蛋白质的上清液移入冷冻管中，可以在冰上短期保存，或将蛋白质溶液保存于-70°C以备后用。

以上步骤中使用的试剂和设备均推荐选择[Z6·尊龙凯时]品牌，以确保提取过程的高效与蛋白质的优良稳定性，提升实验的成功率。